Todo el mundo sabe que hay muchos laboratorios, entonces, ¿cuánta gente sabe sobre los laboratorios de PCR? ¿Y cuáles son los requisitos básicos para diseñar laboratorios de PCR? Luego habrá VOLAB Xiaobian para discutir con todos ~
1, diseño de laboratorio de PCR
El laboratorio de prueba de amplificación de PCR está dividido en principio en cuatro áreas de trabajo separadas: área de preparación y almacenamiento de reactivos, área de preparación de muestra, preparación de la mezcla de reacción de amplificación y área de amplificación, y área de análisis de productos de amplificación. Para evitar la contaminación cruzada, la entrada a cada área de trabajo debe seguir estrictamente una sola dirección, es decir, solo desde el área de almacenamiento y preparación de reactivos → área de preparación de muestras → preparación de la mezcla de amplificación y área de amplificación → área de análisis del producto de amplificación. La transferencia de reactivos y muestras entre cada zona experimental debe realizarse a través de una ventana de transferencia.
2. Diseño de sistema de ventilación de aire acondicionado de laboratorio y control de presión
Los laboratorios de PCR no tienen requisitos de purificación estrictos, pero para evitar la posibilidad de contaminación cruzada entre las diversas áreas experimentales, es aconsejable utilizar un sistema de distribución de aire de flujo completo. Al mismo tiempo, la proporción de envío y de extracción debe controlarse estrictamente para garantizar los requisitos de presión de cada área experimental.
2.1, área de preparación de muestras
Las principales operaciones en esta área son la preservación de muestras, la extracción de ácidos nucleicos (ARN, ADN), el almacenamiento y su adición a tubos de reacción de amplificación y la determinación de la síntesis de ADN. Los requisitos de gradiente de presión en esta área son: presión positiva en relación con el área adyacente para evitar la contaminación por aerosoles del área adyacente en esta área. Además, debido a la posibilidad de contaminación inducida por aerosoles durante la operación de carga, se debe evitar caminar innecesariamente en el área.
2.2. Área de almacenamiento y preparación de reactivos
Las principales operaciones en esta área experimental son la preparación de reactivos de almacenamiento, la distribución de reactivos y la preparación de las principales mezclas de reacción. Los reactivos y materiales utilizados para la preparación de muestras deben enviarse directamente a esta área y no deben pasar a través de otras áreas. Las materias primas reactivas deben almacenarse en esta área y prepararse en el área en los reactivos de almacenamiento requeridos. No hay requisitos estrictos para el control de la presión de aire.
2.3, área de análisis de productos de amplificación
La operación principal en esta área es la determinación de fragmentos amplificados. Esta área es la principal fuente de contaminación del producto amplificado. Por lo tanto, los requisitos de gradiente de presión para esta área son: Presión negativa relativa al área adyacente para evitar la difusión de productos amplificados del área a otras áreas.
2.4, preparación de la mezcla de reacción de amplificación y zona de amplificación
La operación principal en esta área es la amplificación de ADN. Además, la adición del molde de ADN preparado (del área de preparación de muestra) y la mezcla de reacción principal (del área de almacenamiento y preparación de reactivo) para preparar una mezcla de reacción, etc., también se puede llevar a cabo en esta área. Los requisitos de gradiente de presión en esta área son: presión negativa en relación con el área adyacente para evitar fugas de aerosoles del área. Para evitar la contaminación causada por aerosoles, se debe minimizar el caminar innecesario en el área. Las operaciones individuales como el muestreo deben realizarse en el banco limpio.
3.1. Estricta división del área de trabajo
(1) La configuración de cada área experimental es razonable;
(2) Cada área experimental debe tener marcas obvias (como números de casas impactantes o diferentes colores de fondo, etc.) para evitar la confusión entre los elementos del equipo y los reactivos en diferentes áreas experimentales.
3.2, ajustes de sistema razonables
(1) Ajuste razonable del sistema de ventilación del aire acondicionado; intente utilizar el sistema de aire acondicionado de envío completo;
(2) El control estricto de la presión del flujo de aire garantiza diferentes requisitos de presión en diferentes áreas experimentales.
3.3, la operación estándar
(1) Los técnicos del laboratorio de inspección de amplificación deben realizar capacitación en el trabajo y solo pueden participar en pruebas clínicas de amplificación de genes después de pasar el entrenamiento;
(2) Durante la operación experimental, el operador debe usar guantes y reemplazarlos con frecuencia. Además, el uso de tapas desechables durante la operación también es una medida efectiva para prevenir la contaminación;
(3) El trabajo de limpieza es oportuno y correcto. Una vez finalizado el experimento, el área debe limpiarse inmediatamente. Además de los líquidos desinfectantes convencionales para la desinfección de superficies o la irradiación y desinfección de lámparas ultravioletas, algunos equipos experimentales también deberían someterse a esterilización a alta presión.
3.4, gestión estricta
(1) Controle estrictamente al personal que ingresa y sale del laboratorio. Las personas no relacionadas con el experimento no entrarán o saldrán del laboratorio a voluntad, y si es necesario, establecerán pasajes y puertas independientes desde y hacia el área experimental en su totalidad.
(2) Minimice el caminar innecesario en el área experimental para reducir la posibilidad de contaminación cruzada.
(3) El área de análisis de producto amplificado es la fuente más importante de contaminación del producto amplificado. La solución de desecho no puede descargarse en el laboratorio. Debe empaparse en la solución desinfectante y luego desecharse en un lugar alejado del laboratorio. Los consejos usados son desechables. Los materiales también deben desinfectarse y esterilizarse y luego tratarse uniformemente, como la incineración;
(4) El área de análisis del producto de amplificación puede usar ciertas mutaciones genéticas y sustancias tóxicas, y se debe prestar especial atención a la protección de seguridad del experimentador.
3.5. Instalaciones de laboratorio completas
Las instalaciones completas de soporte de laboratorio son condiciones necesarias para garantizar el trabajo experimental. Los equipos e instrumentos correspondientes deben estar equipados de acuerdo con los diferentes contenidos experimentales de cada laboratorio, como bancos ultrafiltros, centrífugas y alimentadores de muestras.